GE(原Pharmacia)葡聚糖凝胶装柱方法

2014年02月11日

 

 GE(原Pharmacia)葡聚糖凝胶

装柱方法

 

(1)乙醇浸泡

    在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干。
 

(2)无盐水浸泡 

    室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀。

 

 

 

(3)盐酸浸泡

    在常温下再用0.1M HCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性。

 

(4)装柱
     将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层。

 

 

(5)平衡
    上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。

 

(6)上样
    凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可。
 

(7)洗脱方法

   可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化。
 

(8)清洗

  每次用完之后,将柱子里的缓冲液置换为去离子水,然后用20%的乙醇封存。
 

(9)在位清洗(CIP)

  凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。                     

 

来源:北京满仓科技有限公司
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